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產(chǎn)品信息
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GeneHero? Cas9 預制穩(wěn)轉(zhuǎn)株
GeneHero? Cas9 穩(wěn)定表達細胞系
復能基因 提供 Cas9 核酸酶的穩(wěn)定表達細胞系。這些細胞系能為您的 CRISPR 基因組編輯應用提供一個方便、高效的工具。
我們會提供預制的GeneHero? Cas9 人類或小鼠穩(wěn)定表達細胞系，如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被穩(wěn)定整合到這些細胞系基因組上的 safe harbor 位點（圖1）。此外，我們也能將 Cas9 核酸酶基因穩(wěn)定整合到您所指定的細胞系基因組。
Cas9 核酸酶與 sgRNAs 這個組合被廣泛用于在真核細胞乃至動物模型上生成靶向基因組修飾，包括基因敲除、突變修飾、內(nèi)源基因融合標簽以及更多其他應用。而基因組上的 safe harbor 位點整合了 Cas9 基因的單克隆人類細胞系能保證該基因表達的安全性、可靠性以及持續(xù)性。
產(chǎn)品優(yōu)勢
Cas9 穩(wěn)定整合將 sgRNA 共轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)導操作的需求降到最低，是高通量 sgRNA 應用的理想選擇。
Safe Harbor 位點整合能確保穩(wěn)定的 Cas9 表達，同時對細胞無副作用。
單克隆細胞系能保證單一基因背景下持續(xù)的、高水平的 Cas9 表達。
可配合復能基因 GeneHero? sgRNA 克隆、sgRNA文庫以及供體克隆服務使用。
圖 1. Cas9 核酸酶穩(wěn)定表達結(jié)構(gòu)的示意圖。Cas9 核酸酶基因被裝載到到 GeneCopoeia 的人類 AAVS1 safe harbor 敲入克隆載體。該載體的結(jié)構(gòu)配合 GeneCopoeia 的safe harbor 基因敲入技術(shù)，能將 Cas9 核酸酶基因敲入到人類第19號染色體上的 AAVS1 位點。單克隆分離通過嘌呤霉素（Puro）藥篩實現(xiàn)。
人類基因組 AAVS1 位點上的穩(wěn)定整合確保了 Cas9 核酸酶基因持續(xù)穩(wěn)定的表達。通過以下的 T7 核酸內(nèi)切酶 I 錯配酶切檢測，我們可以看到 在 AAVS1 位點上 的Cas9 核酸酶基因表達量及活性水平都相當高。（圖2）
圖 2. 穩(wěn)定表達細胞系活性驗證。用靶向 HUWE I 基因的 sgRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 AAVS1 位點穩(wěn)定整合 Cas9 核酸酶基因的人類 H1299 細胞系。24 小時后，收集細胞用于取基因組 DNA。使用GeneCopoeia IndelCheck 檢測體系擴增sgRNA靶向的序列區(qū)，對 PCR 產(chǎn)物進行解鏈和退火處理，對照組不作處理，實驗組用 T7 核酸內(nèi)切酶進行錯配酶切。實驗組酶切產(chǎn)物跑膠獲得預期的酶切條帶，即能證明 Cas9 在這些細胞系中有活性。